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RNA干擾實(shí)驗(yàn)

RNA干擾實(shí)驗(yàn)

簡要描述:
RNA干擾實(shí)驗(yàn)(RNA interference, RNAi)是一種由雙鏈RNA(dsRNA)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象,通過特異性降解目標(biāo)mRNA實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)調(diào)控。

更新時(shí)間:2025-07-24

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廠商性質(zhì):其他

一、RNA干擾實(shí)驗(yàn)定義與核心機(jī)制

RNA干擾(RNA interference, RNAi)是一種由雙鏈RNA(dsRNA)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象,通過特異性降解目標(biāo)mRNA實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)調(diào)控。其核心機(jī)制分為以下步驟:

  1. dsRNA切割
    Dicer酶將長dsRNA或前體miRNA切割為21-23nt的小干擾RNA(siRNA),每條siRNA 3'端有2-3個(gè)突出堿基。

  2. RISC復(fù)合物形成
    siRNA雙鏈解旋后,反義鏈(引導(dǎo)鏈)與Argonaute蛋白結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RISC)。

  3. 靶標(biāo)識別與降解
    RISC通過堿基配對定位同源mRNA,在距離siRNA 3'端12個(gè)堿基處切割mRNA,導(dǎo)致其降解。

二、RNAi類型對比

特征siRNAmiRNA
來源外源dsRNA(病毒、人工合成)內(nèi)源pri-mRNA加工
長度21-23bp21-25nt
互補(bǔ)性wan全互補(bǔ)不wan全互補(bǔ)(3'UTR結(jié)合)
作用機(jī)制切割mRNA抑制翻譯或降解mRNA
穩(wěn)定性低(易降解)
脫靶率較高較低
導(dǎo)入方式化學(xué)合成、轉(zhuǎn)染表達(dá)載體、病毒導(dǎo)入

三、RNA干擾實(shí)驗(yàn)核心應(yīng)用領(lǐng)域

1. 基因功能研究

  • 高通量篩選:利用RNAi文庫系統(tǒng)性沉默基因,解析基因網(wǎng)絡(luò)。

  • 信號通路解析:通過抑制特定基因觀察下游效應(yīng),如MAPK通路研究。

2. 疾病治療

  • 癌癥治療:靶向KRAS、BRAF等癌基因,抑制腫瘤增殖(臨床試驗(yàn)階段)。

  • 抗病毒療法:抑制HBV、HCV病毒基因表達(dá)(如丙型肝炎病毒核心蛋白抑制研究)。

3. 農(nóng)業(yè)應(yīng)用

  • 抗病蟲害作物:通過沉默害蟲關(guān)鍵基因(如Bt棉)提高抗性。

  • 性狀改良:調(diào)控植物激素合成基因,延長果實(shí)保鮮期。

4. 藥物開發(fā)

  • 靶點(diǎn)驗(yàn)證:快速驗(yàn)證新藥靶標(biāo)有效性,如阿爾茨海默病相關(guān)基因篩選。

  • RNA藥物:Onpattro(siRNA藥物)獲批治療轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白淀粉樣變性


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